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O ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) é uma das metodologias imunológicas mais utilizadas no mundo para detecção e quantificação de proteínas, antígenos, anticorpos, hormônios e biomarcadores.

A técnica é amplamente aplicada em:

• diagnóstico clínico;
• indústria farmacêutica;
• pesquisa científica;
• controle microbiológico;
• análises veterinárias;
• segurança alimentar;
• biotecnologia.

O grande diferencial do ELISA está em sua alta sensibilidade, especificidade e possibilidade de processamento em larga escala utilizando microplacas de 96 poços.

O que é ELISA?

O ELISA é uma técnica imunológica baseada na interação altamente específica entre antígeno e anticorpo.

A metodologia utiliza enzimas conjugadas que, ao reagirem com um substrato específico, geram uma alteração detectável, normalmente uma mudança de cor, permitindo identificar e quantificar o analito presente na amostra.

O ensaio é realizado principalmente em microplacas de 96 poços, possibilitando análises simultâneas com alta produtividade.

Como funciona o ELISA?

O princípio do ELISA envolve:

• imobilização do antígeno ou anticorpo na superfície da placa;
• ligação específica entre antígeno e anticorpo;
• utilização de enzima conjugada;
• desenvolvimento de sinal colorimétrico, fluorescente ou quimioluminescente.

A intensidade do sinal gerado é proporcional à concentração da molécula alvo na amostra.

Workflow do ELISA

1. Preparação da microplaca

O primeiro passo consiste na utilização de microplacas específicas para imunoensaios.

As microplacas da Corning  são amplamente utilizadas em rotinas ELISA devido:

• alta capacidade de ligação proteica;
• uniformidade entre poços;
• baixa variabilidade analítica;
• excelente performance óptica.

As placas podem possuir diferentes superfícies:

• High Bind;
• Medium Bind;
• fundo transparente;
• fundo preto;
• fundo branco para luminescência.

2. Adição das amostras e reagentes

As amostras são distribuídas nos poços juntamente com anticorpos ou antígenos específicos.

Nessa etapa, a precisão da pipetagem é fundamental para garantir:

• repetibilidade;
• precisão volumétrica;
• uniformidade entre poços;
• redução de erro operacional.

As micropipetas monocanal e multicanal da Baumann auxiliam diretamente na padronização do processo analítico.

As multicanais são especialmente importantes em placas de 96 poços, permitindo maior produtividade e distribuição homogênea dos reagentes.

Além disso, ponteiras de alta qualidade ajudam a evitar:

• contaminação cruzada;
• formação de aerossóis;
• variações volumétricas.

3. Incubação

Durante a incubação ocorre a ligação específica entre antígeno e anticorpo.

O tempo e a temperatura dessa etapa impactam diretamente:

• sensibilidade;
• especificidade;
• intensidade do sinal.

Alguns protocolos utilizam incubadores com agitação para aumentar a eficiência da reação imunológica.

4. Lavagem da placa

Após a incubação, a placa passa por ciclos de lavagem para remoção de moléculas não ligadas.

Essa etapa é extremamente importante para:

• reduzir background;
• evitar falsos positivos;
• melhorar a relação sinal/ruído.

Reservatórios para multicanal, frascos de reagentes e sistemas de lavagem ajudam na padronização da rotina laboratorial.

Consumíveis frequentemente utilizados:

• reservatórios estéreis;
• filmes seladores;
• frascos para reagentes;
• sistemas de armazenamento;
• placas deep well.

5. Adição do conjugado e substrato

O anticorpo conjugado à enzima reage com o substrato cromogênico, gerando mudança de cor.

As enzimas mais utilizadas incluem:

• HRP (Horseradish Peroxidase);
• Fosfatase Alcalina.

A intensidade da coloração desenvolvida será proporcional à quantidade do analito presente.

6. Leitura da microplaca

A leitura final é realizada em leitores de microplacas através da medição da absorbância.

Nesse momento, a qualidade óptica da placa influencia diretamente:

• precisão da leitura;
• linearidade;
• sensibilidade analítica;
• reprodutibilidade dos resultados.

Principais tipos de ELISA

Existem diferentes formatos da técnica, cada um adequado para determinadas aplicações.

ELISA Direto

Utiliza um anticorpo conjugado diretamente ligado ao antígeno.

Vantagens:

• protocolo mais rápido;
• menos etapas.

ELISA Indireto

Utiliza anticorpo primário e secundário conjugado.

Vantagens:

• maior amplificação de sinal;
• maior sensibilidade.

ELISA Sanduíche

Um dos formatos mais utilizados.

O antígeno fica “preso” entre dois anticorpos específicos.

Vantagens:

• alta especificidade;
• excelente sensibilidade;
• muito utilizado em biomarcadores e citocinas.

ELISA Competitivo

A intensidade do sinal é inversamente proporcional à concentração do analito.

Muito utilizado para:

• moléculas pequenas;
• hormônios;
• pesticidas;
• contaminantes.

Aplicações do ELISA

O ELISA está presente em diversos segmentos laboratoriais:

• diagnóstico sorológico;
• detecção viral;
• dosagem hormonal;
• biomarcadores inflamatórios;
• desenvolvimento farmacêutico;
• controle de qualidade;
• pesquisa imunológica;
• análises veterinárias;
• segurança alimentar.

A técnica também possui grande relevância em estudos de:

• citocinas;
• proteínas inflamatórias;
• anticorpos;
• alergênicos;
• contaminantes.

A importância dos consumíveis laboratoriais no ELISA

Pequenas variações analíticas podem comprometer completamente um ensaio imunológico.

Por isso, a qualidade dos consumíveis utilizados no ELISA é essencial para garantir:

• precisão;
• sensibilidade;
• repetibilidade;
• baixa contaminação;
• padronização do ensaio.

Entre os principais consumíveis utilizados estão:

• microplacas 96 poços;
• micropipetas monocanal e multicanal;
• ponteiras;
• reservatórios;
• filmes seladores;
• frascos para reagentes;
• placas deep well;
• tubos para preparo de amostras.

A J Prolab oferece soluções completas para rotinas ELISA, trabalhando com consumíveis laboratoriais de alta performance das linhas Corning  e Baumann, garantindo maior confiabilidade e eficiência nas análises laboratoriais.